医学·药学
梁晨1, 姜晓霞2, 张锋3, 王霞4, 吴芳1, 章乐1, 吴江东1, 张春军1, 张辉1, 樊超1, 庄睿1, 李文娟1, 张万江1
2013, 31(6): 697-701.
为构建结核杆菌PhoPR双组分系统PhoP、PhoR基因的重组穿梭质粒pMV361-PhoP、pMV361-PhoR并对其
进行鉴定。采用结核分枝杆菌国际标准强毒株 H37Rv菌 株基 因 组 DNA 为 模版,利 用 PCR 技 术分 别 扩 增 PhoP、
PhoR基因编码序列,先克隆于 T-VectorpMD19(Simple),再亚克隆至大肠杆菌-分枝杆菌穿梭表达载体pMV361,
并转化 E.coliDH5α感受态细胞,提取所得的阳性克隆子获得重组表达质粒 pMV361-PhoP、pMV361-PhoR,通 过
PCR及双酶切鉴定。结果显示,结核分枝杆菌国际标准强毒株 H37Rv菌 株基 因 组 DNA 中 扩增 出 的 PhoP、PhoR
基因与 GenBank公布的序列一致,经过 PCR及双酶切鉴定,表明 PhoP、PhoR 基因均 成 功 插 入 了 pMV361穿 梭载
体。由此可知,成功构建了重组穿梭质粒pMV361-PhoP、pMV361-PhoR,为进一步研究 PhoPR 双组分系统奠定了
基础。