畜牧·兽医
李跃峰1, 2, 付强1, 2, 张俊波1, 2, 史慧君1, 2, 李志强1, 2, 程婷婷1, 2张辉1, 2, 曹旭东3, 陈创夫1, 2
2013, 31(3): 318-322.
为了研究结核杆菌毒力因子 ESAT6在结核杆菌感染细胞过程中的功能。采用分子生物学方法,根 据 Gen-
Bank中登录的结核杆菌 H37Rv的 ESAT6基因序列设计1对引物,以结核杆菌 H37Rv基因组 DNA 为模板,PCR
扩增得到 ESAT6基因 DNA 片段。将扩增片段克隆于pGM18-T载体中,测序验证后,再将 ESAT6基因亚克隆至
pEGFP-N1中,经核苷酸序列测定和酶切鉴定获得重组表达质粒 pEGFP-N1-ESAT6。用 重 组 表 达 质 粒 pEGFP-
N1-ESAT6转染293T细胞。结果显示:重组表达质粒 pEGFP-N1-ESAT6测 序 结 果 正 确,转染细胞后出现绿色荧
光,经 Westernblot分析鉴定,可见约35kDa的预期蛋白条带,证实ESAT6-EGFP融合蛋白在293T细胞中获得了
表达。研究结果为进一步研究毒力因子 ESAT6在感染宿主细胞中所发挥胞内生存机制奠定了基础。