医药·卫生
李冬妹, 罗先道, 王生, 潘泽民, 罗星, 谭晓华, 杨磊
2009, 27(3): 317-320.
为构建人类8型疱疹病毒(Human
herpesvirus
8,HHV-8)K1基因的真核表达载体,采集卡波氏肉瘤(Kaposi’ssarcoma,KS)患者血清,采用柱式病毒DNA抽提试剂盒抽提血清中的病毒DNA,采用套式PCR技术检测HHV-8的特异性片断KS330233以判断是否得到了HHV-8
DNA,采用PCR技术扩增HHV8
K1基因并纯化回收,酶切、连接入真核表达载体pcDNA3.1,转化大肠杆菌DH5α,挑取阳性克隆pcDNA3.1/HHV8-K1扩增后,提取质粒,进行双酶切和DNA测序鉴定。结果显示采集了经典型KS血清3例,提取了血清HHV-8DNA,扩增了特异性片断KS330233,测序结果正确提示我们得到了HHV8
DNA,扩增了HHV8
K1基因,构建了pcDNA3.1/HHV8-K1真核表达载体,经限制性内切酶酶切鉴定及测序分析证实了其序列的正确性。由此可知:成功构建了pcDNA3.1/HHV8-K1真核表达载体,为进一步研究该基因的功能奠定良好的实验基础。