目的 利用不同的耳毒性药物建立长爪沙鼠感音神经性耳聋模型,并对3种模型进行比较分析,为感音神经性耳聋的研究提供精准的动物模型。方法 选择长爪沙鼠,建立硫酸卡那霉素和呋塞米联用(KM+Fur)、新霉素(Neo)及哇巴因(Oua)3种耳毒性药物的感音神经性耳聋模型,通过听性脑干反应(ABR)和耳蜗组织形态学检测,比较分析不同耳毒性药物的损伤特点。结果 KM+Fur造模后,与对照组(14.00±1.80)相比,该组(71.00±5.26)长爪沙鼠的听力阈值显著上升,耳蜗HCs大量损伤,而SGNs无明显损伤;Neo造模后,与对照组相比,40 mmol·L^-1 Neo仅影响沙鼠高频32 kHz时听力阈值(60.00±8.66),无明显的组织学改变;而100 mmol·L^-1 Neo组的沙鼠各频率听力阈值均显著上升,且耳蜗HCs及SGNs均严重受损;Oua造模后,1 mmol·L^-1 Oua 和10 mmol·L^-1 Oua均可引起沙鼠各频率听力阈值显著上升,但损伤范围不同,10 mmol·L^-1 Oua使HCs和SGNs均严重受损,而1 mmol·L^-1 Oua仅造成耳蜗SGNs损伤。结论 利用KM+Fur可建立长爪沙鼠HCs特异性受损的感音神经性耳聋模型;40 mmol·L^-1 Neo可建立高频区听功能损伤的感音神经性耳聋模型;利用100 mmol·L^-1 Neo和10 mmol·L^-1 Oua可以建立长爪沙鼠HCs和SGNs均受损的感音神经性耳聋模型;利用1 mmol·L^-1 Oua可以建立长爪沙鼠耳蜗SGNs特异性受损的耳聋模型。

目的 探讨UPF3B对上消化道恶性肿瘤细胞增殖的影响。方法 通过qRT-PCR和Western Blot技术验证胃癌和食管癌细胞中UPF3B的敲低和过表达效率;CCK-8、EdU、平板克隆形成实验评估细胞的增殖能力。结果 在胃癌和食管癌细胞中通过siRNA敲低UPF3B的表达水平,UPF3B的mRNA和蛋白表达水平显著降低,且有统计学意义(P<0.001),CCK8、EdU、平板克隆形成实验结果表明敲低UPF3B抑制胃癌和食管癌细胞的增殖;在胃癌和食管癌细胞中转染UPF3B过表达质粒上调UPF3B的表达水平,UPF3B的mRNA和蛋白表达水平显著升高,且有统计学意义(P<0.001),CCK8、EdU、平板克隆形成实验结果表明过表达UPF3B促进胃癌和食管癌细胞的增殖。结论 UPF3B促进上消化道恶性肿瘤细胞增殖。

目的 探索长链非编码RNA 人浆细胞瘤转化迁移基因1(plasmacytoma variant translocation 1,PVT1)协同真核翻译起始因子4A1(human eukaryotic translation initiation factor4A1,EIF4A1)促进人胃癌细胞SGC-7901增殖与迁移能力的作用。方法 使用Western Blot检测EIF4A1、real time-PCR检测PVT1在胃癌细胞(SGC-7901、NCI-N87、MGC-803、BGC-823)和正常胃黏膜细胞(GES-1)中的表达量。单独或共同过表达胃癌细胞SGC-7901中的PVT1和EIF4A1,EIF4A1的蛋白表达量使用免疫印迹法检测,PVT1的表达水平使用real time-PCR检测,采用划痕实验和Transwell实验检验细胞的迁移能力,采用MTT实验和平板克隆形成法检验细胞的增殖情况,采用免疫印迹法检测E-cadherin,N-cadherin,smad3和TGF-β蛋白表达量。结果 以正常胃黏膜细胞作为对照,筛选有统计学差异的PVT1和EIF4A1的本底表达量低的胃癌细胞(P＜0.05)。单独或共同过表达胃癌细胞中PVT1和EIF4A1后,共同过表达组平板克隆形成数为492±8.72,单独过表达PVT1组平板克隆形成数为251±1.53,单独过表达EIF4A1组平板克隆形成数为228±1.52,对照组平板克隆形成数为205±2.08。在MTT实验中,共同过表达组OD值高于单独过表达组和对照组。Transwell结果显示共同过表达组迁移细胞数为308±29.10,单独过表达PVT1组迁移细胞数为222±14.42,单独过表达EIF4A1组迁移细胞数为206±10.58,对照组迁移细胞数为169±18.04。划痕实验结果提示共同过表达组伤痕愈合速率高于单独过表达组和对照组。免疫印迹结果说明共同过表达组E-cadherin低于单独过表达组和对照组,共同过表达组N-cadherin、smad3和TGF-β高于单独过表达组和对照组。以上结果均具有统计学差异(P<0.05)。结论 过表达PVT1和EIF4A1可以协同促进SGC-7901细胞的增殖能力,并通过改变EMT相关蛋白的表达促进胃癌细胞SGC-7901的迁移能力。

目的 皮层是响应脑缺血缺氧最为敏感的组织之一,基于前期深度测序技术,我们筛选获得响应脑缺血缺氧应激的皮层区目标基因miR-181a及Bcl-2。本研究旨在SH-SY5Y细胞株氧糖剥夺/复糖复氧模型验证二者靶向调控关系及功能,明确miR-181a—Bcl-2调控网络在OGD/R诱导的神经细胞凋亡中的作用。方法 采用线栓法构建大鼠缺血缺氧再灌注损伤模型,脑切片TTC染色及行为学评分法评估模型。应用qRT-PCR及Western Blot验证目标基因的表达。生物信息学分析miR-181a与Bcl-2的靶向结合位点并比对结合位点的保守性,双荧光素酶报告基因实验验证miR-181a与Bcl-2靶向结合的特异性。采用OGD/R细胞模型体外模拟脑缺血再灌注损伤,检测凋亡相关蛋白表达及Hoechst荧光染色评估细胞凋亡。结果 大鼠大脑中动脉阻塞后miR-181a、Bcl-2表达变化趋势相反。RNA hybird软件预测miR-181a可结合Bcl-2的3'-UTR区,且结合区域高度保守。双荧光素酶报告基因实验发现,相对于Bcl-2 3'UTR-WT与mimic-NC共转染组,Bcl-2 3'UTR-WT与miR-181a mimic共转染后的荧光活性更低(P＜0.001),而Bcl-2-Mut与miR-181a mimic共转染组,荧光活性无显著差异(P＞0.05)。分别用miR-181a的模拟物及抑制物转染OGD/R诱导的SH-SY5Y细胞,miR-181a可以抑制Bcl-2 mRNA及其蛋白的表达水平(P＜0.001)。过表达 miR-181a显著增加了SH-SY5Y细胞的凋亡(P＜0.001),而抑制 miR-181a 表达可使 SH-SY5Y细胞凋亡显著降低(P＜0.001)。结论 miR-181a 可靶向结合Bcl-2,下调miR-181a可通过促进Bcl-2的表达进而抑制SH-SY5Y神经细胞OGD/R损伤诱导的细胞凋亡。

目的 通过研究新疆医疗卫生服务体系的运行效率,分析医疗资源配置过程中存在的问题、地州差异以及原因,为建立高质量高效率的医疗卫生服务体系运行机制提供决策依据。方法 本研究数据来源于2017—2021年《新疆统计年鉴》及2016—2020年新疆卫生统计年报,研究对象为医疗卫生服务体系(包括医院、基层医疗卫生机构、专业公共卫生机构),根据以往文献研究和数据的可获得性确定投入产出指标,选择人均GDP、年末人口数及政府卫生支出为环境变量,通过三阶段DEA模型,排除环境因素和随机误差的影响,从静态角度分析十三五期间新疆医疗卫生服务体系的运行效率;使用Dagum基尼系数和莫兰指数分析效率值,探讨其有无空间依赖性。结果 DEA模型显示:不考虑环境因素及随机误差的影响,十三五期间新疆医疗卫生服务体系效率整体较好,综合效率均值为0.919;SFA回归结果显示政府卫生支出的增加可以使医疗卫生服务体系效率提高(P<0.01);剔除环境因素及随机干扰的影响,新疆医疗服务体系综合效率均值为0.893,多处于规模递增或不变状态,区域内差异、区域间差异和超变密度对区域差异的年均贡献率依次为36.05%,33.32%,30.63%,莫兰指数结果显示新疆医疗卫生服务体系的运行效率仅2016年与2019年存在空间相关性(P=0.096,P=0.040)。结论 十三五期间新疆医疗卫生服务体系运行效率处于波动状态,相较于纯技术效率而言,博尔塔拉蒙古自治州和克孜勒苏柯尔克孜自治州亟待改善其规模结构。环境因素中政府卫生支出对效率影响较大,政府可适当增加卫生投入。各地州间效率差距明显,且疆域间差异较大,提示各疆需要针对性解决效率不足的问题。

目的 探究大蒜素调控中性粒细胞杀菌功能抗白色念珠菌感染的作用机制。方法 建立系统性白色念珠菌感染的小鼠模型,通过组织切片染色和肾脏真菌载量检测,验证大蒜素抗白色念珠菌感染的作用;采用体外杀菌实验和超氧化物检测技术,探究大蒜素对中性粒细胞杀菌能力及ROS产生的影响;通过免疫印迹法检测p38 MAPK,JNK,ERK1/2的磷酸化水平,探究大蒜素对丝裂原活化蛋白激酶(mitogen-activated protein kinase,MAPK)信号通路的影响。结果 大蒜素治疗显著降低了小鼠的肾脏真菌负荷;体外实验结果表明,白色念珠菌感染过程中,大蒜素增强了中性粒细胞的杀菌作用并促进了ROS的产生;此外,免疫印迹结果表明,大蒜素对中性粒细胞释放ROS的促进作用依赖于p38 MAPK的激活。结论 大蒜素通过增强p38 MAPK的激活促进中性粒细胞释放ROS,从而发挥抗白色念珠菌感染的作用,可能成为治疗真菌感染的潜力化合物。

目的 基于中医“治寒以热”辨证理论和温里祛寒方剂温中散寒的功效,对温里祛寒方中抗寒活性成分筛选并进行体外药效学验证。方法 基于大数据分析温里祛寒方剂药材分布特性;通过系统药理学方法进行活性成分的虚拟筛选和关键靶点的富集分析。建立体外BCPAP细胞低温联合缺氧模型,通过代表成分的细胞活力及调控活性氧水平、抗凋亡/坏死情况进行体外药效学验证。结果 共收集到温里祛寒方剂147方,涉及中药材153味,药性主要为温/热、辛/苦,归脾肾肝经,具有生热、发散风寒之功效;药材中的化学成分主要参与细胞对外界物质及环境刺激的反应、体温调节等生物过程和HIF-1信号通路、细胞凋亡、甲状腺激素合成等信号通路的调节。体外药效学结果显示,代表成分阿魏酸、姜黄素、肉桂醛、6-姜酚、甘草苷能够有效抑制低温联合缺氧诱导BCPAP细胞活力的降低,改善细胞氧化应激水平和凋亡/坏死情况 (P<0.05)。分子对接结果显示活性成分与关键蛋白具有良好的结合活性(结合能<-5.0 kcal·mol^-1)。结论 温里祛寒方剂及其活性成分能够帮助机体应对低温刺激,其抗寒作用与改善包括甲状腺在内的神经内分泌系统损伤相关。

目的 研究TREM2在红花黄色素(safflower yellow,SY) 调节胶质细胞活化,改善APP/PS1小鼠学习记忆能力中的作用。方法 6月龄Wide Type小鼠为WT组;同月龄APP/PS1小鼠(Tg)70只,建立慢病毒(LV, lentivirus)介导的TREM2基因沉默的APP/PS1小鼠模型,分别为Tg组、Tg+ LV组、Tg+LV-C组、Tg+LV +SY 30 mg·kg^-1组、Tg+LV-C +SY 30 mg·kg^-1组、Tg+LV+多奈哌齐 0.75 mg·kg^-1组、Tg+LV-C+多奈哌齐 0.75 mg·kg^-1组。给药后通过行为学实验评价痴呆小鼠的空间学习记忆和认知能力;免疫组织化学法观察小鼠脑组织Aβ 沉积及小胶质细胞活化标志物Iba-1的表达;酶联免疫吸附测定法(ELISA)测定小鼠皮层组织中IL-6、INF-γ、IL-4、IL-10因子表达水平;蛋白免疫印迹技术(Western blot)检测皮层组织中TLR4、p-NF-κB p65/NF-κB p65的蛋白表达。结果 与Tg组小鼠相比,Tg+LV组小鼠学习记忆能力下降,6E10、Iba-1的阳性表达显著增加(P<0.01),小鼠皮层组织中 IL-6、INF-γ的表达水平明显升高(P<0.05或P<0.01),TREM2蛋白表达明显下降(P<0.05),上调TLR4和p-NF-κB p65/NF-κB p65蛋白的表达;SY 30 mg·kg^-1 给药后可提高小鼠学习记忆能力,6E10、Iba-1的阳性表达显著下降(P<0.01),小鼠皮层组织中 IL-6、INF-γ的表达水平明显下降(P<0.05或P<0.01),IL-4的表达水平显著升高(P<0.01),上调TREM2蛋白表达,下调TLR4和p-NF-κB p65/NF-κB p65蛋白的表达。结论 TREM2沉默加剧了Aβ 在大脑中的病理积累,减少炎症因子释放,SY可以减少TREM2沉默的APP/PS1小鼠脑组织中Aβ 沉积及小胶质细胞活化,通过抑制TLR4介导的NF-κB 信号通路,减少炎症介质释放,最终改善TREM2沉默的APP/PS1小鼠学习记忆能力。

目的 本课题组前期构建了一种正交泛素传递方法,并发现染色体浓缩调节蛋白2(RCC2)是泛素连接酶CHIP的潜在底物。本实验旨在验证CHIP是否能介导RCC2的泛素化及降解,以期通过CHIP来泛素化调控RCC2的表达和功能。方法 首先构建CHIP及其突变体质粒,验证CHIP与RCC2是否有相互作用;然后构建pLVX-RCC2-FLAG重组质粒并转染进CHIP敲减细胞株(shCHIP)、HEK293细胞株、CHIP过表达细胞株(OE CHIP),通过免疫共沉淀下拉富集RCC2-FLAG并检测其泛素化水平;接下来在HEK293细胞中转染不同量的CHIP,以及设置CHX chase蛋白稳定性实验,检测RCC2的蛋白水平变化;最后利用泛素突变体K48R-Ub及K11R-Ub进行CHIP介导RCC2上形成泛素链的实验检测。结果 在HEK293细胞中,CHIP能够介导RCC2的泛素化,并在RCC2上形成K48和K11多聚泛素链,促进其通过蛋白酶体发生降解。结论 泛素连接酶CHIP能够介导RCC2的泛素化及降解,为实现通过CHIP来泛素化调控RCC2提供了理论基础。

目的 探讨E2F基因与肝癌患者的预后关系及其作为肝癌标志物的可能性。方法 GENT2 数据库用于评估 E2F基因在肝癌中的表达。生存分析和 Cox 分析提示 E2F基因的预后价值。使用 STRING 数据库构建包含 40 个最相似基因和 E2F1-8 的基因网络。TIMER数据库用于分析 E2F基因表达与免疫细胞浸润之间的相关性。cBioPortal数据库分析E2F1-8的基因突变情况。GEO数据集用于验证 E2F5 的表达差异。UALCAN、MEXPRESS、GEO和TCGA数据库中甲基化信息用于分析E2F5的表达与启动子甲基化之间的相关性,并通过人类肝癌细胞系进行验证。结果 E2F1-8在肝癌组织中均高表达。晚期肝癌患者E2F1-3 和E2F5-8的转录水平与总生存率(OS)呈正相关。多因素分析显示,高水平的E2F5 表达是肝癌患者OS缩短的独立预后因素。E2F5/7在肝癌中的表达与肿瘤诱导的免疫反应激活和免疫浸润有关。E2F5在肿瘤组织中高表达与基因突变及启动子甲基化水平相关。结论 E2F5是肝癌患者生存的独立预后生物标志物。E2F家族成员在肝癌中的作用可能与其在细胞周期调节、免疫细胞浸润或基因突变等方面的功能有关。

目的 研究长链脂肪酸C17∶0对GPR40受体的激活作用,并探讨其介导的信号转导分子机制。方法 在体外培养HEK293T细胞的基础上,免疫荧光结合共聚焦显微镜检测受体膜定位和内吞情况;通过多功能酶标仪检测Ca²⁺流的强弱;Western Blot检测ERK1/2的磷酸化水平。结果 免疫荧光结果显示:C17∶0可通过招募β-arrestin 2介导GPR40内吞;胞内Ca²⁺动员检测结果证实:长链脂肪酸C17∶0可作用于GPR40引起胞内Ca²⁺浓度升高;Western Blot结果显示:C17∶0可作用于GPR40诱导ERK1/2磷酸化。结论 C17∶0是GPR40的内源性配体,通过激活Gaq和Gai/o蛋白介导的信号通路,引起胞内Ca²⁺动员及ERK1/2的磷酸化。

目的 研究合成出的嘧啶甲酸乙酯类化合物的¹H-NMR图谱,确证其结构并分析图谱规律;方法 经Biginelli缩合反应所得六种化合物,测定的¹H -NMR图谱分别与计算机分析软件模拟结果及文献值相对照,比较各质子在图谱中的化学位移结果 丰富了的波谱数据,找出并检定了相关化合物¹H -NMR图谱出峰顺序和规律,并定性确证了化合物;结论 合成工艺可行且结构为预设化合物。

目的 探讨枸杞多糖(LBP)对阿尔茨海默病(AD)合并2型糖尿病(T2DM)小鼠学习记忆能力及脑内Tau蛋白磷酸化水平的影响。方法 5月龄C57BL/6J小鼠16只随机分为对照组、T2DM组,同月龄APP/PS1小鼠32只随机分为AD组、AD+T2DM组、LBP组(100 mg·kg^-1)、多奈哌齐组(0.75 mg·kg^-1),每组各8只。T2DM组、AD+T2DM组、LBP组、多奈哌齐组小鼠高糖高脂饲料联合腹腔注射链脲佐菌素建立T2DM模型。治疗组以相应剂量药物干预,其余组给予等体积生理盐水。连续给药3个月后,Morris水迷宫实验评价各组小鼠学习记忆能力,HE染色观察各组小鼠脑组织细胞形态变化,Western Blot检测各组小鼠脑内不同位点磷酸化Tau蛋白及GSK3β蛋白的表达水平。结果 LBP可缩短AD+T2DM模型小鼠逃避潜伏期、第一次穿越平台时间(P<0.05,P<0.05),增加穿越平台次数及目标象限停留时间(P<0.01,P<0.01),改善大脑皮层神经元形态损伤,降低皮层及海马Tau蛋白Ser404、Ser396及Ser199位点磷酸化水平(P<0.05,P<0.05,P<0.05;P>0.05,P<0.01,P<0.01)和GSK-3β及Tyr216位点磷酸化水平(P>0.05,P<0.01;P<0.01,P<0.01),提高GSK-3β蛋白Ser9位点磷酸化水平(P<0.01,P<0.05)。结论 枸杞多糖可改善AD+T2DM模型小鼠的学习记忆能力,降低脑内Tau蛋白的磷酸化水平。

目的 探讨石河子地区转录因子SP1蛋白在口腔鳞状细胞癌(oral squamous cell carcinoma,OSCC)组织中的表达及其预后中的价值。方法 采用免疫组织化学染色法检测122例OSCC和72例癌旁正常组织中SP1蛋白的表达情况,分析SP1蛋白的表达与OSCC患者临床病理资料的关系,利用Kaplan-Meier生存分析,分析OSCC患者SP1蛋白表达在预后中的价值。结果 SP1蛋白的表达主要位于OSCC的细胞核,少量表达于细胞浆,其在OSCC中的表达明显高于癌旁正常组织(P<0.001)。SP1蛋白的表达在肿瘤分化程度(P =0.002)、T分期(P=0.044)和TNM分期(P=0.046)有统计学意义(P<0.05)。SP1蛋白预测OSCC 的ROC曲线下面积为 0. 958,诊断灵敏度为93.4%和特异性91.7%。Kaplan-Meier 生存分析显示,SP1蛋白高表达患者预后相对较差(P=0.002 8)。运用Cox风险回归模型分析影响OSCC 患者预后的因素,发现肿瘤T分期、SP1蛋白高表达为OSCC患者预后不良的危险因素(P<0.05) 。结论 SP1蛋白在预测OSCC及预后的评估中具有重要意义,SP1蛋白是OSCC潜在的一种新型临床诊断和预后评估的生物标志物。

目的 探讨棕榈酸(Palmitic acid,PA)对脂肪细胞内质网应激,以及对miR-4431表达及释放水平的影响,阐明肥胖后microRNAs表达及释放水平变化的可能分子机制。方法 收集正常(n=6)及肥胖受试个体(n=6)腹部脂肪组织样本,qRT-PCR检测内质网应激标志物PERK、IRE1α、ATF6及miR-4431的表达水平。构建饮食诱导的肥胖小鼠模型,动态监测小鼠体重,评价小鼠葡萄糖耐量及胰岛素耐量,qRT-PCR检测小鼠附睾脂肪组织中PERK、IRE1α、ATF6、miR-4431的表达水平及血清中miR-4431的释放水平。体外培养小鼠胚胎成纤维细胞,诱导分化为成熟脂肪细胞后,使用200 μmol·L^-1及500 μmol·L^-1 PA处理,qRT-PCR检测细胞PERK、IRE1α、ATF6及miR-4431表达水平及细胞培养上清液中miR-4431的释放水平。运用生物信息学数据库TransmiR和hTFtarget 分析预测miR-4431上游的转录调控网络。结果 (1)肥胖受试个体脂肪组织中内质网应激标志物PERK、IRE1α、ATF6及miR-4431的表达水平显著高于正常体重受试个体(P＜0.05),且miR-4431表达水平与受试个体血糖及脂肪组织中PERK、IRE1α、ATF6的表达水平呈正相关;(2)同普通饮食对照组小鼠相比,高脂饮食喂养的肥胖小鼠血糖水平显著升高、葡萄糖耐量及胰岛素敏感性受损(P＜0.05),附睾脂肪组织中内质网应激标志物PERK、IRE1α、ATF6、miR-4431的表达水平显著升高;同时小鼠血清中miR-4431含量显著增加(P＜0.05),且与小鼠血糖、内质网应激标志物PERK、IRE1α、ATF6的表达水平正相关;(3)使用不同浓度PA处理诱导分化成熟的脂肪细胞后,细胞中PERK、IRE1α、ATF6、miR-4431的表达水平及上清中miR-4431含量均显著高于对照组(P＜0.05)。(4)内质网应激相关转录因子参与了miR-4431的表达调控。结论 肥胖后脂肪组织内质网应激可能是miR-4431表达增加的重要原因;高浓度棕榈酸可诱发脂肪细胞内质网应激,并促进miR-4431的表达及释放。

目的 肝细胞癌的进展与免疫微环境的失调密切相关。趋化因子在招募免疫细胞进入肿瘤组织的过程中起着重要作用。本文探讨了CCL5在肝癌进展中的作用。方法 通过GEO数据库分析CCL5在肝癌组织中的表达及与患者预后的关联,通过免疫组织化学染色检测CCL5在肝癌患者临床标本中的表达情况,通过TCGA数据库分析CCL5与免疫浸润的相关性及表达量异常的原因。结果 CCL5在肝细胞癌组织中表达下降并与患者预后不良相关。CCL5低表达与肝癌组织中的免疫细胞浸润减少有关,而过表达CCL5能够抑制肝癌细胞的增殖。启动子DNA高甲基化引起了CCL5在肝癌组织中的低表达。结论 高甲基化相关的CCL5低表达能够促进肝癌免疫抑制及肿瘤细胞的增殖,CCL5可作为肝癌的一个预后指标和潜在治疗靶点。

目的 评价冬凌草甲素对脂多糖 (LPS) 诱导的小鼠肺泡巨噬细胞(MH-S)的抗炎作用,并探讨其机制。方法 台盼蓝法检测不同浓度(0、0.25、0.5、1.0、2.0 μg·mL^-1)冬凌草甲素对MH-S细胞的毒性影响;用荧光定量PCR和酶联免疫吸附试验分别检测不同浓度冬凌草甲素对脂多糖诱导MH-S细胞一氧化氮 (NO)、诱导型一氧化氮合酶 (iNOS)、环氧合酶-2 (COX-2) 和前列腺素 (PGE2) 的mRNA和蛋白质水平的影响;Western blot检测不同浓度冬凌草甲素对脂多糖刺激的MH-S细胞中mitogen-activated protein kinases (MAPK)磷酸化水平的影响。结果 台盼蓝实验结果显示不同浓度的冬凌草甲素对MH-S细胞无明显毒性;荧光定量PCR和酶联免疫吸附试验结果显示冬凌草甲素可以剂量依赖性地抑制脂多糖诱导的MH-S细胞中NO、iNOS、COX-2和PGE2 mRNA和蛋白质的表达;Western blot结果显示冬凌草甲素剂量依赖性地抑制p38、ERK1/2和JNK的磷酸化。结论 冬凌草甲素能有效抑制脂多糖诱导的MH-S细胞炎症因子的产生,其机制可能与MAPK信号通路的抑制有关。

目的 探讨山楂叶提取物对庆大霉素致急性肾损伤(AKI)大鼠的保护作用及机制。方法 大鼠连续7 d腹腔注射100 mg·kg^-1庆大霉素,诱导急性肾损伤的发生。通过测定血清BUN、SCR和尿液NAG、LZM含量,检测模型是否成功建立。将急性肾损伤大鼠随机分为模型组,山楂叶提取物低剂量组,山楂叶提取物中剂量组,山楂叶提取物高剂量组及阳性药组,口服给药14 d。血清用于检测肾功能指标;肾组织进行苏木精-伊红(HE)染色,肾组织匀浆用以检测生化指标及炎症因子含量、MAPK信号通路的相关蛋白表达水平。结果 大鼠连续7 d腹腔注射100 mg·kg^-1庆大霉素可成功建立急性肾损伤模型。山楂叶提取物能缓解庆大霉素引起的肾组织病理学改变,降低肾体指数和血清BUN、SCR含量,降低肾组织NO、MDA、NOS含量,增加SOD和GSH-PX含量,降低炎症因子IL-1β、IL-6、TNF-α和KIM-1的表达,抑制肾组织中P-p38 MAPK、P-ERK1/2、P-JNK蛋白的表达。结论 山楂叶提取物对庆大霉素致AKI大鼠有保护作用,可能是通过抑制MAPK信号通路表达,从而减轻炎症因子释放,改善肾损伤,起到保护肾功能作用。

目的 探究TSG-6对多房棘球蚴感染模型小鼠早期肝纤维化的影响。方法 将20只肝脏已感染多房棘球蚴20d的C57BL/6小鼠随机分为模型组、TSG-6治疗组每组10只;另外设置对照组10只。TSG-6治疗组每三天经腹腔注射重组鼠TSG-6蛋白(rmTSG-6) 0.5μg/25μLPBS,对照组和模型组每三天经腹腔注射等量PBS。治疗30 d后处死各组小鼠,取各组小鼠血清,多房棘球蚴病灶周围肝组织以及对照组正常肝组织制作组织切片。ELISA检测各组小鼠血清中ALT及AST的含量、HE和Masson染色观察各组小鼠肝组织病理改变及胶原含量、免疫组化和Western blotting检测各组小鼠肝组织纤维化标志物α-SMA、CollagenI、CollagenIII的表达。结果 与模型组相比,经TSG-6治疗后各组小鼠血清中ALT、AST的含量减少,肝组织炎性细胞浸润与胶原纤维沉积减少,纤维化标志物α-SMA、CollagenI、CollagenIII的表达降低。结论 TSG-6抑制了多房棘球蚴感染小鼠早期肝纤维化。

目的 探讨大蒜素(Allicin)对巨噬细胞(RAW264.7细胞)氧化损伤的作用及其机制。方法 构建细粒棘球蚴囊液(EgCF)刺激RAW264.7细胞损伤模型。将RAW264.7细胞随机分成6组:对照组;EgCF诱导组(终浓度2 mg·mL^-1 EgCF处理24 h);不同浓度Allicin预处理组(分别使用15、20、 30、40 μg·mL^-1预处理20 h后,EgcF作用4 h)。CCK-8法检测细胞存活率;qRT-PCR检测核因子E2相关因子(Nrf2)、过氧化物酶(CAT)、血红素加氧酶(HO-1)、Cu-Zn超氧化物歧化酶(SOD-1)、Mn超氧化物歧化酶(SOD-2)、Kelch样ECH关联蛋白1(Keap1)、谷氨酸-半胱氨酸连接酶催化亚基(Gclc)、谷氨酸-半胱氨酸连接酶调节亚基(Gclm)的mRNA表达;Western blot检测Nrf2蛋白表达;微板法检测总抗氧化能力(T-AOC)、超氧化物歧化酶(SOD)、细胞丙二醛(MDA)含量;流式细胞术检测活性氧(ROS)变化。结果 与对照组相比,EgCF组中细胞存活率下降,Nrf2蛋白、MDA和ROS水平上调(P<0.05);与EgCF组相比,Allicin预处理组中细胞存活率、CAT、HO-1、SOD(1/2)、Gclm和T-AOC表达升高,Keap1、Gclc、MDA、ROS表达降低(P<0.05)。结论 Allicin对EgCF诱导RAW264.7细胞氧化损伤有保护作用,其机制可能与激活Nrf2/Keap1信号通路,提高胞内抗氧化酶活性,清除胞内过量ROS有关。

目的 子宫内膜癌(Endometrial Cancer,EC)是女性生殖系统常见的恶性肿瘤,但其发生发展的分子机制目前尚不十分明确。MOB1B(Mps One Binder Kinase Activator 1B)是Hippo通路激酶级联反应的核心组成部分,是一个肿瘤抑制因子,而其在EC中的分子作用尚未有文献报道。尝试阐明MOB1B对EC细胞生物学行为的影响及可能的分子机制,将为临床治疗EC提供新的实验依据和理论基础。方法 利用starBase数据库分析MOB1B、CCND1(Cyclin D1)和XIAP(X-linked inhibitor of apoptosis)在EC中的mRNA表达水平,以及运用在线生物信息学软件Kaplan-Meier Plotter分析MOB1B的表达水平与EC患者生存率的关系;qRT-PCR 和Western Blot 检测EC细胞系Ishikawa中转染MOB1B过表达质粒后MOB1B、CCND1和XIAP的mRNA和蛋白表达水平;CCK-8、细胞集落形成、Transwell和划痕实验检测细胞的增殖、侵袭和迁移能力。结果 starBase数据库分析发现:在EC患者肿瘤组织中MOB1B的mRNA表达水平显著降低(P＜0.05);利用Kaplan-Meier Plotter数据库进一步分析后发现:MOB1B低表达的EC患者生存率明显降低(P＜0.05);在EC细胞中转染MOB1B过表达质粒后,MOB1B的mRNA和蛋白表达水平显著升高,而促癌因子CCND1和XIAP的mRNA和蛋白表达水平显著降低(P＜0.05);与对照组相比,过表达MOB1B后EC细胞的增殖、侵袭和迁移能力被显著抑制(P＜0.05)。结论 MOB1B过表达可抑制EC的细胞增殖、侵袭和迁移能力,其分子机制可能与抑制促癌因子CCND1和XIAP的表达有关。

目的 探讨膀胱癌Mcl-1的表达与肿瘤微环境(Tumor microenvironment,TME)中肿瘤相关巨噬细胞(Tumour-associated macrophages, TAM)的相关性,以及在膀胱癌治疗中的影响。方法 通过TCGA、GEPIA、TIMER等数据库分析膀胱癌中Mcl-1表达水平与肿瘤相关巨噬细胞、肿瘤微环境免疫细胞和基质细胞浸润的相关性。免疫组织化学检测膀胱癌组织及癌旁组织中M1/M2型巨噬细胞、Mcl-1的表达。结果 膀胱癌组织中Mcl-1表达与膀胱肿瘤微环境免疫评分(Immune Score)和基质评分(Stromal Score)正相关(P<0.001)、M1/M2型肿瘤相关巨噬细胞及其标志物(M1:CD86;M2:CD163)正相关(P<0.001)、患者的总生存期呈负相关(P<0.05)。免疫组织化学结果显示,与膀胱癌旁组织相比,CD86、CD163、Mcl-1在膀胱癌组织中显著高表达(P<0.001);Mcl-1表达水平与膀胱癌病理分级相关(P<0.05)。结论 膀胱癌中Mcl-1的表达与肿瘤相关巨噬细胞极化密切相关,可调控Mcl-1影响M1/M2型巨噬细胞,辅助BCG膀胱灌注免疫治疗。

目的 根据系统药理学方法预测天山堇菜治疗2型糖尿病的作用机制,并通过动物实验验证降糖效果。方法 通过数据库检索和文献挖掘获得天山堇菜活性成分、作用靶点及2型糖尿病相关的疾病靶点,运用Cytoscape 3.7.2软件绘制活性成分-靶点网络图,构建靶点PPI网络图,进行GO分析及KEGG通路分析,同时建立糖尿病小鼠模型验证不同浓度的天山堇菜提取物降糖效果。结果 筛选出10个活性化合物,干预2型糖尿病的关键靶点35个,多个通路与2型糖尿病发病机制相关。动物实验表明,天山堇菜提取物对糖尿病小鼠具有降糖作用,对于正常小鼠血糖没有影响。结论 本文采用系统药理学方法预测了天山堇菜的作用机制,表明天山堇菜通过多靶点、多通路产生抗2型糖尿病的作用,该作用通过动物实验得到了验证,为天山堇菜的进一步开发提供了理论基础。

目的 噬菌体展示技术(Phage display technology, PDT)是一种独立于任何免疫系统并在体外进行筛选多肽或者抗体的一种技术,可以从噬菌体抗体库中筛选得到特异性结合的单克隆抗体(monoclonal antibody)。本研究提出了一种应用于噬菌体抗体库筛选的质粒构建方法,旨在提高噬菌体展示技术的筛选效率。方法 首先将编码整个抗体结合域的基因(以单链可变片段scFv的形式)融合到基因III,并在融合噬菌粒scFv-PIII间引入牛凝血酶(thrombin)酶切位点,通过SDS-PAGE及Western Blot实验验证牛凝血酶特异性洗脱效果,同时利用ELISA(酶联免疫吸附实验)及噬菌体滴度检测特异性洗脱后单链抗体的结合活性,最后根据该质粒设计一种新的模型筛选方法,验证筛选效率。结果 本研究成功构建目标质粒并利用该质粒进行模型筛选,证实筛选效率得到提高。结论 在构建噬菌体抗体库的噬菌粒载体上添加牛凝血酶特异性酶切位点的筛选方法,可以减少筛选轮次高效筛选出特异性噬菌体抗体。

目的 探讨三硫二苄基(DTS)对非小细胞肺癌(NSCLC)细胞系A549细胞增殖、转移和侵袭的抑制作用及其机制。方法 克隆形成和CCK-8检测DTS对A549细胞增殖的影响;Annexin V-FITC/PI双染色法与免疫印迹检测DTS对A549细胞凋亡及凋亡相关蛋白Bax,Bcl-2表达的影响;划痕实验和Transwell侵袭实验检测DTS对A549细胞迁移和侵袭的影响;免疫印迹检测DTS对A549细胞上皮间质转化(EMT)和JAK/STAT3信号通路相关蛋白表达的影响;利用IL-6可以激活STAT3信号通路,利用划痕实验,Transwell侵袭实验和Western blot免疫印迹分析验证DTS对A549细胞增殖和转移的作用依赖JAK/STAT3信号通路。结果 我们的结果显示DTS能抑制A549细胞增殖、迁移、侵袭并诱导其凋亡;DTS诱导促凋亡基因Bax的表达,降低抗凋亡基因Bcl-2的表达;DTS减弱EMT转化,且与JAK和STAT3磷酸化相关;IL-6通过激活STAT3信号通路可以挽救A549细胞的迁移能力。结论 DTS具有干预JAK/STAT3信号通路,从而抑制A549细胞增殖,促进细胞凋亡,抑制细胞迁移和侵袭的生物学作用。因此,DTS可能成为潜在治疗NSCLC的药物。

目的 为解决急性髓系白血病(acute myeloid leukemia,AML)应用流式细胞术进行诊断时遇到的技术门槛和分析效率问题,研究实用的自动化AML诊断分析技术,推动流式实验室AML全程自动化分析技术的发展。方法 本文开发ArcDia(Automated Registration of Cell populations and Diagnosis and Immunophenotyping of AML)方法,对来源于公共数据库的AML基准数据(数据1),和来源于流式实验室的AML检测数据(数据2)进行细胞聚类分析,采用有监督分类模型对亚群中心即宏细胞进行二级分类并标注,最后提取亚群特征并进行AML诊断。结果 聚类方法为正态混合模型时,数据1诊断结果的灵敏度、特异度、准确率、F-measure为1、0.99、0.99、0.99,数据2为0.91、0.95、0.94、0.94;使用FlowSOM时,相应诊断结果的4个指标,数据1为1、0.98、0.98、0.98,数据2为0.88、0.95、0.93、0.93。结论 诊断结果准确率较高,自动化过程完整且贴近临床分析,这展示了该自动化诊断技术的准确性和可用性,可以在临床流式检验室中推广应用。

目的 观察细粒棘球蚴囊液对脂多糖(LPS)诱导巨噬细胞RAW264.7分泌炎性因子的影响,并探讨其可能的机制。方法 培养小鼠巨噬细胞,分为四组处理:对照、囊液(2.15 mg·mL^-1)、LPS(1 μg^-1mL^-1)以及LPS+囊液。刺激5 h后,qRT-PCR检测TNF-α、IL-6和IL-10的表达;刺激1 h后,免疫印迹法检测STAT3和p-STAT3的蛋白水平。结果 囊液能显著抑制LPS诱导的RAW264.7细胞中IL-6和TNF-α的mRNA表达,却明显促进IL-10的表达。进一步发现囊液能促进STAT3信号的活化水平,而当使用STAT3的抑制剂S3I-201后,STAT3的磷酸化水平明显降低,同时回升了TNF-α的表达。结论 细粒棘球蚴囊液能抑制RAW264.7细胞炎症反应,IL-10/STAT3信号通路可能参与调控此过程。

目的 探讨从新疆软紫草中提取分离得到的咖啡酸四聚体同分异构体(KC-Ⅱ)对脂多糖(LPS)诱导的RAW264.7巨噬细胞的体外抗炎作用研究。方法 采用MTT比色法检测细胞活力、Griess法检测细胞中NO含量、RT-PCR检测KC-Ⅱ对LPS诱导的RAW264.7细胞中促炎因子的mRNA表达影响,Western Blot检测INOS和COX-2以及Akt、MAPK/NF-κB信号通路的蛋白表达水平,细胞免疫荧光法检测了P-Erk1/2和P-P65蛋白在细胞中的分布以及荧光强度。结果 MTT结果显示,KC-Ⅱ浓度低于300 μmol·L^-1时细胞增殖差异无统计学意义;RT-PCR结果显示,与模型组比较,KC-Ⅱ处理组能显著抑制LPS诱导的RAW264.7细胞中INOS、COX2、IFN-β以及促炎因子IL-6、TNF-α和IL-1β的表达;Western Blot结果表明,KC-Ⅱ处理组明显抑制INOS、COX2的表达以及MAPK/NF-κB信号通路中Erk1/2、Jnk、P65以及IKKα/β的表达。结论 KC-Ⅱ化合物通过抑制MAPK/NF-κB信号通路的Erk1/2、Jnk、NF-κB以及IKKα/β的蛋白磷酸化表达,从而在LPS诱导的RAW264.7细胞中发挥抗炎作用。

目的 探讨耻垢分枝杆菌中MSMEG_3150蛋白的功能。方法 构建耻垢分枝杆菌MSMEG_3150过表达株;采用CRISPRi技术构建耻垢分枝杆菌MSMEG_3150沉默株。使用MSMEG_3150过表达株、沉默株和野生型菌株进行实验研究。测定细菌生长曲线;刚果红实验检测细菌表面疏水性。透射电镜、扫描电镜等观察菌体形态、结构。LC-MS测定脂肪酸含量。结晶紫染色定量生物膜形成。结果 过表达MSMEG_3150导致菌体变长、细胞壁增厚,生长速度加快,脂质含量增多,增强细菌表面的疏水性,促进生物膜形成。结论 MSMEG_3150可能通过调控耻垢分枝杆菌细胞壁的脂质含量和表面疏水性从而影响细菌的生长特性及生物膜的形成。

目的 神经元中的肌酸激酶CKBB是维持细胞正常能量代谢平衡的关键调节蛋白,它对神经退变神经元内的氧化应激压力敏感且含量随病变发生而降低,但其蛋白水平改变的原因尚未阐明。方法 采用过氧化氢处理SH-SY5Y神经细胞,研究CKBB在氧化应激条件下的降解机制。使用MTT法对细胞活力进行检测,利用Hoechst33342染色细胞核表征细胞生存状态。使用Western blot法对CKBB的含量进行检测。分别使用自噬抑制剂Bafilomycin A1及蛋白酶体抑制剂MG-132处理细胞,验证CKBB具体降解途径。采用激光共聚焦显微镜检测胞内RFP-LC3,GFP-CKBB共定位情况。使用免疫沉淀法抓取CKBB蛋白,对泛素化修饰进行检测。结果 在过氧化氢处理下CKBB含量明显下降,使用自噬抑制剂及蛋白酶体抑制剂处理对CKBB的含量均有明显挽回作用。过氧化氢处理,促进CKBB与LC3共定位,并导致CKBB泛素化修饰水平显著升高。结论 CKBB在过氧化氢处理的氧化应激条件下,经由自噬及蛋白酶体两条途径发生蛋白降解。