畜牧·兽医
于要升, 林杉, 王开胜, 雷小萍, 梁慧慧, 杨恒, 赵宗胜
为了探讨 miR-200b 是否通过靶向作用 GNAQ 基因并以此调控发情过程,本研究通过双荧光素酶报告基因系
统,验证 miR-200b 对靶基因 GNAQ 的真实干扰作用,并在下丘脑神经细胞和卵巢颗粒的细胞中过表达 miR-200b,
用 荧 光 定 量 PCR 检 测 了 GNAQ 下 游 基 因 的 表 达 变 化 。 结 果 显 示 : 共 转 染 GNAQ-3'UTR-psi-CHECKTM-2 和
pri-miR-200b-pcDNA3.1 (+) 组的 hela 细胞荧光素酶值是只转染 psi-CHECKTM-2 组的 77.5%,其余 两组 与 只转 染
psiCHECKTM-2 组之间的差异无统计学意义。通过 miR-200b 干扰载体转染下丘脑神经细胞,选择 GNAQ 下游基因
ITPR、PRKCB、GNA1、CREB、MAP3K1、GPR54、KISS1 及 GnRH 进行实时荧光定量检测,结果发现:miR-200b 干扰组和
对照组相比,GNAQ 基因显著下调,下游 ITPR、PRKCB、 GNA1 和 MAP3K1、发情关键基因 GPR54、KISS1 和 GnRH 显
著上调。通过 miR-200b 干扰载体转染卵巢颗粒细胞,选择 GNAQ 下游基因 COMT、HSD3B1、CYP1A1 和 PKA 基因进
行表达量验证,结果表明:miR-200b 干扰后,GNAQ 基因表达量升高,下游基因 COMT、HSD3B1、CYP1A1 和 PKA 表达
量下降。由此推测,miR-200b 真实靶向调控 GNAQ 基因,进而调控发情过程。