畜牧·兽医
姚楠1, 2, 白杰3, 4, 张雪梅2, 3, 吴卫东2, 李文蓉4
2012, 30(5): 592-597.
比较重组牛杀菌通透性增加蛋白(BPI)N 端714bp编码序列的原核和真核表达载体在大肠杆菌和 HEK293
细 胞中的表达,为进一步研究BPI蛋白 N 端的功能奠定基础。采用 RT-PCR方法从牛的外周血中扩增出BPI蛋白
N 端的714bp基因片段,分别克隆至原核表达载体 pGEX-4T-1和真核表达载体 pLEX-MCS后,再分别转化大肠
杆 菌BL21菌株、感染 HEK293细胞进行重组蛋白的表达。Westernblotting检测重组BPI蛋白 N 端在原核和真核
细胞中的表达。结果显示:BPI蛋白 N 端的原核表达载体 pGEX-BPI714和真核表达载体 pLEX-BPI714导 入 原 核
和真核细胞中均得到表达。Westernblotting检 测 显 示,重 组 GST-BPI714融合蛋白在大肠杆菌中仅能低水平表
达,且大都以包涵体形式存在;相反,构建的真核表达载体pLEX-BPI714转染到 HEK293细胞后,特异的目的蛋白
能高效表达。本研究成功构建了牛源 BPI714原核表达载体和真核表达载体,重组 BPI714在大肠杆菌中表达不稳
定,在 HEK293细胞中能够稳定表达。