医学·药学
吴淑媛, 曹冬冬, 李冬梅, 张晓艳, 徐慧玲, 李英, 潘泽民, 李冬妹
目的 研究 miR-34a-5p 对卡波氏肉瘤相关疱疹病毒( Kaposi's sarcoma-associated herpesvirus,KSHV) 感染的神
经细胞增殖和迁移能力的影响。方法 选择 KSHV 感染的 SH-SY5Y 神经细胞( SK-RG) 和 SH-SY5Y 细胞,进行差异
表达的 miRNA 转录组测序和生物信息学分析,通过 qRT-PCR 法验证 SH-SY5Y、SK-RG 中 miR-34a-5p 表达水平。
采用 Lipofectamine 2000 分别将 miR-34a-5p mimics 与 miR-NC 转染至 SK-RG 细胞,qRT-PCR 检测转染效果。采用
MTT 法及平板克隆实验检测细胞增殖能力。通过 Transwell 及划痕实验比较两组细胞的迁移能力。采用 TargetScan
分析 miR-34a-5p 与候选靶基因 c-fos 基因 3'UTR 区的结合位点,采用双荧光素酶报告基因实验检测 miR-34a-5p
和 c-fos 3'UTR 区的靶向调控关系以分析其作用机制。采用 Western blot 在转染 miR-34a-5p mimics 与 miR-NC 的
细胞中检测靶基因 c-fos 的表达。结果 转录组测序结果及 qRT-PCR 验证均提示,SK-RG 细胞中 miR-34a-5p 的水
平低于 SH-SY5Y 细胞( P<0. 05) 。于 SK-RG 细胞中过量表达 miR-34a-5p 后,MTT 和平板克隆实验结果表明 miR-
34a-5p 组细胞增殖能力低于 miR-NC 对照组( P<0. 05) 。Transwell 和细胞划痕实验结果表明,miR-34a-5p 组细胞
迁移能力低于 miR-NC 对照组( P<0. 05) 。双荧光素酶报告基因实验结果提示 miR-34a-5p 可通过 3'UTR 区调控
c-fos 的表达。Western blot 结果显示,miR-34a-5p 可负向调控 c-fos 表达。结论 miR-34a-5p 可能通过抑制 c-fos
的表达而抑制 KSHV 感染的神经细胞的增殖和迁移能力,可能成为治疗 KSHV 感染相关疾病的小分子 miRNA 候选
药物。